感染細胞的處理方法
點擊次數(shù):658 更新時間:2016-06-27
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將狀態(tài)良好的目的細胞接種到24孔板,使細胞濃度為1×105/ml細胞,接種細胞數(shù)量因細胞的生長速度而略有不同,一般是保證第二天進行病毒感染的時候細胞匯合率介于50%至70%之間。ELISA試劑盒
(二)病毒感染
1.感染細胞*佳MOI的測定MOI(Multiplicity of Infection,感染復數(shù))是指每個細胞感染的病毒數(shù),通常MOI越高,病毒整合到染色體的數(shù)量以及目的蛋白的表達量越高。對于分裂活躍的細胞,比如Hela、293細胞,MOI=1~3時,80%以上的細胞均表達目的基因。而對于非分裂細胞,比如原代細胞,感染效率較低。需要進行MOI梯度摸索實驗,選擇適合的MOI進行實驗。
2.感染步驟
按實驗需要將細胞鋪板(比如12孔板);細胞數(shù)以第2天密度約50%為宜;37℃培養(yǎng)過夜。
對于不適用Polybrene的細胞,以上步驟省略,直接進入下面步驟:
感染前,從冰箱取出并在37℃水浴中快速融化病毒,吸去細胞原有培養(yǎng)基,將病毒原液加入細胞中,輕輕8字混勻。感染后第二天(約12小時),吸去含病毒的培養(yǎng)液,換上新鮮的*培養(yǎng)液,繼續(xù)37℃培養(yǎng)。感染后48小時,對于帶GFP報告基因的病毒,可通過熒光顯微鏡觀測GFP表達效率,對于攜帶Puromycin抗性基因的病毒,換上含適當濃度的Puromycin的新鮮*培養(yǎng)液,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)導的細胞株。
對于Polybrene可施加的細胞:準備*培養(yǎng)基和Polybrene混合物,Polybrene終濃度為摸索得到的zui適終濃度。移去培養(yǎng)基并添加0.5mlPolybrene/培養(yǎng)基混合物于每孔中(適用于24孔板,其他孔板請相應調(diào)整體)。
Phospho-HistoneH2A.X(Tyr143)磷酸化組蛋白H2AX抗體
Phospho-HSP27(Ser254)磷酸化熱休克蛋白27抗體
phospho-HSP70(Tyr41)磷酸化熱休克蛋白70抗體
phospho-HSF1(Ser303)磷酸化熱休克因子1抗體
phospho-HSF1(Ser307)磷酸化熱休克因子1抗體
phospho-HSP70(Tyr525)磷酸化熱休克蛋白70抗體
HACE1E3泛素蛋白連接酶HACE1抗體
Hamartin結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體
HNF4A肝細胞核因子4α抗體
phospho-HNF4(Ser313)磷酸化肝細胞核因子4α抗體
HELLS淋巴特異性解旋酶抗體
HRASLS2HRAS樣抑制因子2抗體
HSP40homolog熱休克蛋白家族40抗體
RBMX糖蛋白P43抗體
HSD3B7滋養(yǎng)層細胞抗原3β7抗體
HSP22熱休克蛋白-22抗體
HRH4組織胺H4受體抗體
ELISA試劑盒
將狀態(tài)良好的目的細胞接種到24孔板,使細胞濃度為1×105/ml細胞,接種細胞數(shù)量因細胞的生長速度而略有不同,一般是保證第二天進行病毒感染的時候細胞匯合率介于50%至70%之間。ELISA試劑盒
(二)病毒感染
1.感染細胞*佳MOI的測定MOI(Multiplicity of Infection,感染復數(shù))是指每個細胞感染的病毒數(shù),通常MOI越高,病毒整合到染色體的數(shù)量以及目的蛋白的表達量越高。對于分裂活躍的細胞,比如Hela、293細胞,MOI=1~3時,80%以上的細胞均表達目的基因。而對于非分裂細胞,比如原代細胞,感染效率較低。需要進行MOI梯度摸索實驗,選擇適合的MOI進行實驗。
2.感染步驟
按實驗需要將細胞鋪板(比如12孔板);細胞數(shù)以第2天密度約50%為宜;37℃培養(yǎng)過夜。
對于不適用Polybrene的細胞,以上步驟省略,直接進入下面步驟:
感染前,從冰箱取出并在37℃水浴中快速融化病毒,吸去細胞原有培養(yǎng)基,將病毒原液加入細胞中,輕輕8字混勻。感染后第二天(約12小時),吸去含病毒的培養(yǎng)液,換上新鮮的*培養(yǎng)液,繼續(xù)37℃培養(yǎng)。感染后48小時,對于帶GFP報告基因的病毒,可通過熒光顯微鏡觀測GFP表達效率,對于攜帶Puromycin抗性基因的病毒,換上含適當濃度的Puromycin的新鮮*培養(yǎng)液,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)導的細胞株。
對于Polybrene可施加的細胞:準備*培養(yǎng)基和Polybrene混合物,Polybrene終濃度為摸索得到的zui適終濃度。移去培養(yǎng)基并添加0.5mlPolybrene/培養(yǎng)基混合物于每孔中(適用于24孔板,其他孔板請相應調(diào)整體)。
Phospho-HistoneH2A.X(Tyr143)磷酸化組蛋白H2AX抗體
Phospho-HSP27(Ser254)磷酸化熱休克蛋白27抗體
phospho-HSP70(Tyr41)磷酸化熱休克蛋白70抗體
phospho-HSF1(Ser303)磷酸化熱休克因子1抗體
phospho-HSF1(Ser307)磷酸化熱休克因子1抗體
phospho-HSP70(Tyr525)磷酸化熱休克蛋白70抗體
HACE1E3泛素蛋白連接酶HACE1抗體
Hamartin結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體
HNF4A肝細胞核因子4α抗體
phospho-HNF4(Ser313)磷酸化肝細胞核因子4α抗體
HELLS淋巴特異性解旋酶抗體
HRASLS2HRAS樣抑制因子2抗體
HSP40homolog熱休克蛋白家族40抗體
RBMX糖蛋白P43抗體
HSD3B7滋養(yǎng)層細胞抗原3β7抗體
HSP22熱休克蛋白-22抗體
HRH4組織胺H4受體抗體
ELISA試劑盒