植物維生素D3(VD3)ELISA試劑盒操作步驟和洗板方法
點擊次數:779 更新時間:2018-11-14
植物維生素D3(VD3)ELISA試劑盒
操作步驟:各試劑在使用前平衡至室溫。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外,余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul,注意不要有氣泡,輕輕混勻,酶標板加上蓋,37℃反應120分鐘。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。
3. 每孔加檢測溶液A工作液 100ul,37℃,60分鐘。洗板3次,350ul/每孔,甩干。
4. 每孔加檢測溶液B工作液 100ul,37℃,60分鐘,洗板5次,甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色30分鐘(此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯)。
6. 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(此時蘭色立轉黃色)。用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內,浸泡1-2分鐘,根據需要,重復此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。