操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90) 中文名稱:中性紅-甲基藍(lán)染色液 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:100ml 產(chǎn)品貨號:BJ-01X6705 用途: 可以將死細(xì)胞染成藍(lán)色,活細(xì)胞的液泡系呈紅色。 注意事項(xiàng): 液泡系包括高爾基復(fù)合體、溶酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、轉(zhuǎn)運(yùn)泡、吞噬泡等。中性紅是液泡系的專一活性染色劑,在細(xì)胞處于生活狀態(tài)時(shí),只將液泡系染成紅色,細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不被染色。 儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。 水解乳蛋白 250g萋-尼氏染色液進(jìn)口、國產(chǎn)Ziehl-Neelsen Strain10毫升×3支細(xì)菌耐酸染色液 2 ug pNFAT-TA-Luc pNFAT-TA-Luc 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Natriuretic peptides A 1瓶 HOS株 HOS 低溫運(yùn)輸和保存空腸彎曲菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)進(jìn)口、國產(chǎn)Skirrow Medium Base250克用于空腸彎曲菌的分離培養(yǎng) 250mL Phosphate Citrate Buffer,2X Phosphate Citrate Buffer,2X 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人分泌性卷曲相關(guān)蛋白4(sFRP-4)ELISA試劑盒 200次 一管式病毒RNAout One-Tube Viral RNAOUT 4℃保存 2 ug pYES6/CT pYES6/CT 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 78-5000 pg/mL 轉(zhuǎn)基因植物cry1A基因核酸檢測試劑盒 水平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 Water Plate Count Agar 250g 15.6-1000 pg/mL 番茄特定基因序列(PG)核酸檢測試劑盒 沙門氏志賀氏增菌液 Salmonella Shigiella Enrichment 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Arginine 1 管 TB1大腸桿菌 TB1 E.coli Strain -80℃保存 250g 聚乙二醇 6000 PEG6000 室溫陰涼干燥保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human GDNF family receptor alpha-1 1瓶 MDA-MB-435S株 MDA-MB-435S 低溫運(yùn)輸和保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Insulin receptor 中性紅-甲基藍(lán)染色液牛催產(chǎn)素(OT)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 小鼠甲狀旁腺激素(PTH)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 猴子過氧化氫(CAT)免疫試劑盒*直銷 豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠乳腺癌標(biāo)志物-CA153免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 山羊孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 植物K1(VK1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人尿素相關(guān)蛋白C(UreC)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱:Sodium Tellurite Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g |