細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：抗酸染色液(Ziehl-Neelsen熱染法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：3×50ml|3×100ml

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X6915

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

Cryptosporidium baileyi貝氏隱孢子蟲LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Solute carrier family 1  溶質(zhì)攜帶物家族-1抗體 規(guī)格: 0.2mlOCEL1  緊密連接蛋白/小分子膠原蛋白OCEL1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Dermatobia hominis人膚蠅探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周LACE1  泌升高蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlBAI2/Brain Specific Angiogenesis Inhibitor 2  腦特異性管生成抑制蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fructus lycii枸杞子染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Rabbit Anti-rat IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 0.5mlAFP  甲胎蛋白抗體 0.1ml

Yersinia enterocolitica小腸結(jié)腸炎耶爾森LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周GPI  糖磷脂酰肌醇抗體 規(guī)格: 0.1mlCD84/SLAMF5  CD84抗體 規(guī)格: 0.1ml

Cysticercus cellulosae豬囊尾蚴探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CFTR  囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗體 規(guī)格: 0.2mlGFI1B  獨(dú)立生因子1B抗體 規(guī)格: 0.2ml

鯊魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Donkey Anti-human IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1mlHBV pre S1/S2 protein  人乙肝毒pre S1/S2蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

核桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit anti-chicken IgM whole serum  兔抗雞IgM抗清 規(guī)格: 1mlDPOLA/DNA polymerase alpha  DNA聚合α抗體 規(guī)格: 0.2ml

Avian Sarcoma Virus(ASV)禽類肉瘤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ARA24  雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-horse IgM/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1ml

Pseudomonas syringae pv. sesami丁香假單胞桿芝麻致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CCDC138  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白138抗體 規(guī)格: 0.2mlAQP8/Aquaporin 8  水通道蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2ml

Herba taraxaci蒲公英PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-ITGB3(Tyr773)  磷酸化整合素β3抗體 規(guī)格: 0.1mlExportin 1/CRM1  染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1/染色體區(qū)域穩(wěn)定必需蛋白抗體 0.1ml

抗酸染色液(Ziehl-Neelsen熱染法)人腺二核苷酸(NAD)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠4-羥基壬烯酸(HNE)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人乳頭狀瘤病毒抗體(IgM)免疫試劑盒*直銷

腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂（VRBDA） 英文名稱：Violet Red Bile Dextrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人抗外切體復(fù)合物成分RRP45(EXOSC9)抗體免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

D-環(huán)絲溶液 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*10

人高香草酸(HVA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

BYP瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人白介素15(IL-15)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

豬誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

犬乙酰受體抗體(AChRab)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝