操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:Ac-VEID-FMK(caspase 6 抑制劑 ) 英文名稱:Caspase 6 Inhibitor Z-VE(OMe)ID(OMe)-FMK 產(chǎn)品規(guī)格:20μl 產(chǎn)品貨號:BJ-01X7017 英文名稱:Caspase 6 Inhibitor Z-VE(OMe)ID(OMe)-FMK 產(chǎn)品規(guī)格:20μl 濃度:5mM in DMSO 分子式:C31H45FN4O10 分子量:652.9 純度:≥95% (TLC) 儲存:-20℃,有效期12個月 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Salmonella enterica腸道沙門氏LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周RGS5 G蛋白信號轉(zhuǎn)導調(diào)節(jié)因子5抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Monkey IgM/Cy3 Cy3標記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1ml Aspergillus spp. 曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周Phospho-PKM2 (Tyr105) 磷酸化丙酮酸激M2抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-B-Raf (Thr597) 磷酸化B-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml Fructus hordei germinatus麥芽探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-C-Myc(Thr358) 磷酸化致基因C-Myc抗體 規(guī)格: 0.1mlCripto-1 畸胎瘤衍化生因子抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml Heterakis gallinarum雞異刺線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-PI3 Kinase p110 beta(Ser1070) 磷酸化磷脂酰肌醇激(PI3Kβ)抗體 規(guī)格: 0.1mlREF-1/APEX1 多功能DNA修復抗體 規(guī)格: 0.1ml Bonamia exitiosus殺蠣包拉米蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-PDGFRA(Tyr1018) 磷酸化小板源性生因子受體-α抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-PKC delta (Ser645) 磷酸化蛋白激C亞性D型抗體 規(guī)格: 0.1ml Porcine Circovirus 2 (PCV-2)豬圓環(huán)病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 -20℃ 一年 1-2周GM-CSFR alpha/CD116/CSF2RA 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子受體α抗體 規(guī)格: 0.2mlVHLH/Von Hippel Lindau 腦視網(wǎng)膜管瘤G7蛋白抗體(逢希伯-林道氏) 規(guī)格: 0.2ml 麝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HACE1 E3泛素蛋白連接HACE1抗體 規(guī)格: 0.2ml Globicatella sanguinis血球鏈探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周OPN/BSP 骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)人 規(guī)格: 0.1ml Apiosporina morbosa李黑節(jié)病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CPXCR1 瘤/睪抗原77抗體 規(guī)格: 0.2ml 馬源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Delta Catenin δ連環(huán)蛋白/δ連環(huán)素/δ鏈接素抗體(δ-catenin) 規(guī)格: 0.2ml Ac-VEID-FMK(caspase 6 抑制劑 )人相撲結(jié)合UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)免疫試劑盒*直銷 鴿子白蛋白(Albumin)免疫試劑盒進口、組裝 人Ⅻ(FⅫ)免疫試劑盒進口、組裝 液體雙抗增菌液 英文名稱:Liquid Double Anti Bacteria 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人抗副流感病毒IgM抗體(anti-PIV IgM)免疫試劑盒進口、分裝 UBA培養(yǎng)基 英文名稱:UBA Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人兒茶抑素免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 MS培養(yǎng)基(不含瓊脂和蔗糖) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫試劑盒*直銷 豬甘油酸酯激2(PGK2)免疫試劑盒*直銷 犬膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)免疫試劑盒進口、分裝
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