培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí); 4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 產(chǎn)品參數(shù): 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 5α還原酶同工酶抑制劑(Dutasteride) | Dutasteride | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg | BJ-01X8282 |
商品詳細(xì)介紹: Dutasteride(GG745)是5α還原酶同工酶抑制劑,還可能因其結(jié)構(gòu)域DHT相似對(duì)雄激素受體(AR)產(chǎn)生脫靶效應(yīng)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :164656-23-9 別名:GG 745;GI 198745 純度:99.97% 分子量:528.53 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明: 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點(diǎn): 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 人 interleukin 8 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛妊娠特異性蛋白B(PSPB)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 CD34 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛熱休克蛋白72(HSP-72)免疫試劑盒*直銷 人 paxillin 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 GAPDH 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛醛氧化(aldehyde oxidases,AO)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 CTSL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛醛固酮(ALD)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 AKT1S1 / PRAS40 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛羥脂酰輔A脫氫免疫試劑盒*直銷 人 PRKCQ / PRKCT 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛羥甲基戊二酸單酰輔A(HMG-CoA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 glypican 4 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛羥脯(Hyp)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 PAK2 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛前列腺素F2α(PGF2α)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 CD274 / B7-H1 / PD-L1 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒*直銷 人 BMP-7 基因全長(zhǎng)ORF克隆牛葡萄糖激(GCK)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 5α還原酶同工酶抑制劑(Dutasteride)微量丙二醛(MDA)測(cè)試盒/脂質(zhì)過氧化物(LPO)測(cè)試盒 50T|100T 2 ug pPICZα E pPICZα E 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測(cè)試盒(G-6-PD) 24T 果糖(腦膜炎奈瑟氏菌專用) 20ml/支 堿性磷酸酶測(cè)試盒(AKP) 48T 2 ug pBV 220 pBV 220 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 酸性磷酸酶測(cè)試盒(ACP) 48T 霍亂雙糖鐵瓊脂(KIA) KIA 250g 肝/肌糖元測(cè)試盒 48T 1g 異丙基 -β-D- 硫代半乳糖苷 IPTG 4℃避光保存 一氧化氮合成酶(NOS)測(cè)試盒[測(cè)總NOS(T-NOS)] 24T|50T 固氮菌用阿須貝氏培養(yǎng)基 Nitrogen-fixing bacteria with the A Sugai’s medium 250g 超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒[測(cè)總SOD(Cu-Zn、Mn、總)] 96T|48T 500 mL F12K培養(yǎng)基(含1%雙抗) Cell Culture Medium -20℃保存 超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒(總SOD,WST-1法) 96T|48T 250mL Acetate Buffer(乙酸緩沖液),1M,pH3.5 Acetate Buffer,1M,pH3.5 常溫保存 總抗氧化能力(T-AOC)測(cè)試盒(比色法) 24T 10次 一站式RNA電泳套裝 One-Stop RNA Electrophoresis Kit 4℃保存 活性氧(羥自由基)測(cè)試盒(比色法) 50T 2 ug pGAPZ A pGAPZ A 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒 100~500T Reactive Oxygen Species Assay Kit氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基(2015藥典) Mannitol Salt Agar 250g
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