操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90) 中文名稱(chēng):Clk4抑制劑(ML167) 英文名稱(chēng):ML167 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg 產(chǎn)品貨號(hào):BJ-01X8595 ML167是一種高度選擇性的Cdc2樣激酶4(Clk4)抑制劑,IC50為136nM,比作用于相關(guān)激酶Clk1,Clk2,Clk3和Dyrk1A/1B的選擇性高10多倍。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :1285702-20-6 別名:CID44968231;NCGC00188654 純度:98.51% 分子量:335.36 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。 人 CLUL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽石蠟切片組織PAR-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次 人 NR5A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒 10/50 次 人 ALDH3A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒 10/50 次 人 GDI1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽PAR-2蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 5次 人 MYLIP 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽PAR-2蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 5次 人 ARHGAP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽PAR-2蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒 25次 人 ARHGEF16 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽?細(xì)胞PAR-3蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒 10/20次 人 IFI44L 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽載玻片細(xì)胞PAR-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次 人 CTSD 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽冰凍切片組織PAR-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次 人 ALDH3B2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽石蠟切片組織PAR-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次 人 ACKR2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽載玻片細(xì)胞PAR-3蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次 Clk4抑制劑(ML167)Anthrax 炭疽桿菌抗體 規(guī)格: 0.2ml phospho-c-Jun(Thr239) 磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1ml CREPT 瘤高表達(dá)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml DHRS4L2 短鏈脫/還原家族4樣2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml Mouse Anti-human IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1mlGNMT 甘-N-甲基轉(zhuǎn)移 規(guī)格: 0.2ml SERINC3 絲合并蛋白3抗體(瘤差異表達(dá)蛋白) 規(guī)格: 0.2ml Rabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1ml PDCD7 凋亡相關(guān)蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Avidin/APC APC標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1ml Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml Kazrin Kazrin蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml ACY1/Aminoacylase 1 氨基酰化1抗體 規(guī)格: 0.2ml
|