實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結合，兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品特點：
1. 黑色普雷沃菌探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學修飾的熱啟動聚合酶，反應特異性高，*程度地避免了非特異擴增；
2. 反應緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強，反應重復性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 特異性熒光標記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量：
內(nèi)標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

大鼠輸尿管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

中國藍糖瓊脂/中國藍瓊脂/China Blue Lactose Agar弱選擇性培養(yǎng)基，腸道致病菌選擇分離250克國產(chǎn)/進口

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes白地霉 Geotrichum candidum

人肝實質(zhì)細胞*培養(yǎng)基釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

EDTA Buffer(50x)/EDTA 緩沖(IHC抗原修復, 50x)海氏腸球菌

細胞周期素D2(CCND2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Cyclin D2 (CCND2)

VCaP(人前列腺細胞)5×106cells/瓶×2

血瓊脂培養(yǎng)基基礎 規(guī)格： 250g 用途： 加入脫纖維羊血或兔血，制成血瓊脂培養(yǎng)基，用于營養(yǎng)要求較高的細菌的培養(yǎng)及溶血試驗(GB 4789.10－...

中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii苜蓿中華瘤菌

瓊脂條/寒天/瓊脂/洋菜/石花菜/瓊膠/AgarBR250克國產(chǎn)/進口

大鼠甲狀腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

黑色普雷沃菌探針法熒光定量PCR試劑盒人臍靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL

Mtsb肉湯/改良胰蛋白胨大豆肉湯/改良胰酪胨大豆肉湯/改良胰酶大豆湯/Mtsb Broth With Novobiocin/Modified Tryptic Soy Broth大腸桿菌O157選擇性增菌250克國產(chǎn)/進口

戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

CoC1(人卵巢細胞)5×106cells/瓶×2

尖孢鐮刀菌豌豆?；?Fusarium oxysporum f. sp. pisi地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis

Caco-2(人結直腸腺細胞)Sf-9(昆蟲細胞)

麥康凱瓊脂NO.3 規(guī)格： 250g 用途： 用于食品和環(huán)境樣本中沙門氏菌(傷寒沙門氏菌除外)的選擇性增菌培養(yǎng)(GB/T4789.28－2003 中4.13，G...

RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2

人食管細胞英文名稱：KYSE410

IBRS-2(豬腎細胞)5×106cells/瓶×2

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae無花果曲霉 Aspergillus ficuum