操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:蛋白激酶CK2抑制劑(TBB) 英文名稱:TBB 產品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg 產品貨號:BJ-01X7484 TBB是一種選擇性的蛋白激酶CK2(CK2)抑制劑,IC50為1.6μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :17374-26-4 別名:NSC 231634;TBB (enzyme inhibitor) 純度:98.14% 分子量:434.71 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。 Ehrlichiae spp.艾利希體屬(埃立克體屬)通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周CD328/Siglec-7 唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素7抗體 規(guī)格: 0.2ml Ibaraki Virus牛茨城病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MGAT5 糖蛋白GNTVA抗體 規(guī)格: 0.2ml Rhizoma drynariae骨碎補探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周RELMa/RELM alpha 抵抗素樣分子α抗體 規(guī)格: 0.2ml HIV-2 Provirus HIV-2前病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-LRP1(Ser4523) 磷酸化脂蛋白受體相關蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml Border Disease Virus(BDV)羊邊界病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-chicken IgM/HRP 辣根過氧化物標記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1ml Rhizoma acori tatarinowii石菖蒲LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周mSin3A 同源轉錄調節(jié)蛋白Sin3A抗體 規(guī)格: 0.2ml 獼猴源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周EDIL3 表皮生因子樣重復折疊1結構域蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml Moraxella spp.莫拉氏屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CACNA1G/Cav3.1 電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體 規(guī)格: 0.1ml Hydrangea Ringspot Virus(HRSV)八仙花環(huán)斑病毒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Activated protein C/PROC1 活化蛋白C抗體 規(guī)格: 0.1ml Radix et caulis acanthopanacis senticosi刺五加PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr740) 磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規(guī)格: 0.1ml 蛋白激酶CK2抑制劑(TBB)病毒RdRp聚合酶抑制劑 CYP3A4/CYP24A1抑制劑(Ketoconazole) CDK9抑制劑(CDK9-IN-2) CYP2C9抑制劑(Sulfaphenazole) integrase抑制劑(Raltegravir potassium salt) 衣殼抑制劑(Pleconaril) RSV聚合酶抑制劑(ALS-8112) G6PD抑制劑(RRx-001) RSV融合抑制劑(TMC353121) 逆轉錄酶抑制劑(Abacavir) 蛋白質合成抑制劑(Streptomycin sulfate)
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