產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細(xì)介紹：

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

人 HPRT1 基因全長ORF克隆人相關(guān)抗原9(SPAG9)抗體免疫試劑盒*直銷

人 PRKAB2 基因全長ORF克隆人相關(guān)抗原7(SPAG7)免疫試劑盒進口、組裝

人 ULK1 基因全長ORF克隆人精脒/精胺N(1)-乙酰轉(zhuǎn)移樣蛋白1(SATL1)免疫試劑盒進口、分裝

人 ABCB1 基因全長ORF克隆人精胺合成(SRM)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 FOXP2 基因全長ORF克隆人精氨酰-tRNA合成(RARS)免疫試劑盒*直銷

人 PSMB8 基因全長ORF克隆人精脫羧(ADC)免疫試劑盒進口、組裝

人 LOXL3 基因全長ORF克隆人精2(ARG2)免疫試劑盒進口、分裝

人 SMOC1 基因全長ORF克隆人精(Arg)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 VDR 基因全長ORF克隆人緊密連接蛋白1(ZO1)免疫試劑盒*直銷

人 SP1 基因全長ORF克隆人金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1(ADAMTS1)免疫試劑盒進口、組裝

人 FUK 基因全長ORF克隆人金屬硫蛋白2(MT-2)免疫試劑盒進口、分裝

泛-Raf抑制劑(CCT196969)五羥色胺受體激動劑和拮抗劑(MSAA)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Flibanserin2 ug pSP64 pSP64 低溫運輸，-20℃保存

M1和M3受體介導(dǎo)抑制劑(Pregnenolone)  1mL(10mM)|1g|5g  Pregnenolone400U RNase抑制劑（人源） Human RNase Inhibitor -20℃保存

D2DR/D4DR抑制劑和5-羥色胺受體拮抗劑  1mL(10mM)|100mg|500mg  Loxapine2 ug pCMV-SPORT6 PPP2R3A pCMV-SPORT6 PPP2R3A 低溫運輸，-20℃保存

鈉離子通道Nav1.7抑制劑  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  CNV1014802 hydrochloridePreston肉湯基礎(chǔ) Preston Broth Base 250g

SSRI和5-HT1A受體部分激動劑  1mL(10mM)|10mg|50mg  Vilazodone Hydrochloride25mg 多聚 -L- 賴 (7-15 萬 ) Poly-L-Lysine -20℃保存

多巴胺D2受體激動劑和促乳素抑制劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Quinagolide hydrochloride50T 人注意缺陷多巴胺載脂蛋白基因多態(tài)性PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

FAAH抑制劑（JNJ-42165279）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  JNJ-421652795 g L-Arginine（NO前體） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

FAF1抑制劑(KR-33493)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  KR-33493250ml E. Coli Lysis Buffer  E. Coli Lysis Buffer  常溫保存

AMPK激活劑  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg  Latrepirdine dihydrochloride100mL SSPE溶液,20× SSPE, 20× 常溫

鄰苯二酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)抑制劑  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Entacapone2 ug PINDCSPD PINDCSPD 低溫運輸，-20℃保存

M3受體抑制劑(Imidafenacin)  1mL(10mM)|200mg|500mg  Imidafenacin亞碲酸鉀血瓊脂基礎(chǔ) Potassium Tellurite Blood Agar Base 250g