操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：尼氏小體染色液 英文名稱：Nissl body Staining Solution 產(chǎn)品規(guī)格：100ml 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6606 尼氏體(Nissl body)或稱尼氏小體是分布于神經(jīng)細胞胞質(zhì)內(nèi)的三角形或橢圓形小塊狀物質(zhì)，能被堿性染料如硫堇、甲藍和焦油紫等染料染成紫藍色。各種神經(jīng)細胞內(nèi)都含有尼氏體，但其形狀、數(shù)量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中，但不在于軸突和包體的軸丘。另外，尼氏體會因為生理狀態(tài)的變化而變化，尼氏體是神經(jīng)元內(nèi)合成蛋白質(zhì)合成的重要部位，當神經(jīng)元受到刺激后，包體內(nèi)尼氏體會明顯減少。 尼氏染色液(Nissl Stain，焦油紫法)采用焦油紫(Cresyl violet)作為核心染料，焦油紫具有感光作用，能夠很好地顯示尼氏體變化。主要優(yōu)點是操作簡便、染色穩(wěn)定、適用范圍廣，可用于石蠟組織切片的尼氏物質(zhì)、神經(jīng)元等的染色，尼氏體的存在和消失是神經(jīng)細胞是否受損的重要指標，當發(fā)生腦炎、腦缺血、軸突反應等情況時，尼氏體會發(fā)生溶解甚至消失。 組份： 焦油紫染色液 100mL 分色液 100mL 操作步驟(僅供參考)： 1. 新鮮組織固定于乙醇、Carnoy 固定液或中性福爾馬林溶液后，常規(guī)脫水包埋。 2. 切片厚5μm（注意3），常規(guī)脫蠟至水。 3. 切片入焦油紫染色液中，將染缸置于37℃溫箱浸染10-30min。 4. 蒸餾水沖洗。 5. 入分色液中分化10s-20s，在顯微鏡下觀察至背景接近于無色為止。 6. 無水乙醇迅速脫水。二甲苯透明，中性樹膠封固。 7. 尼氏體:紫色;細胞核:淡紫色;細胞質(zhì):淡紫色。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Cowpea Severe Mosaic Virus(CPSMV)豇豆重花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis鳥分枝桿類結(jié)核亞型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Yersinia ruckeri魯氏耶爾森LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 六種致瀉大腸桿六重PCR試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Radix cyathulae川牛膝PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Carnation Ringspot Virus(CRSV)康乃馨環(huán)駁病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus kochiae地膚子LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Marteilia refringens折光馬爾太蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Enterocytozoon hepatopenaei(EHP)蝦肝腸微胞蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Herba houttuyniae魚腥草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Borrelia vincenti奮森疏螺旋體（奮森包柔螺旋體）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Xanthomonas campestris pv. vesicatoria野油菜黃單胞辣椒斑點病致變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 尼氏小體染色液牛血清白蛋白(BSA)抗體(IgG)免疫試劑盒進口、組裝 小鼠免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒*直銷 雞肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠Wnt-10b蛋白(WNT10B)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠細胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)免疫試劑盒進口、組裝 兔色素上皮衍生因子(PEDF)免疫試劑盒*直銷 大鼠果糖胺(FRA)免疫試劑盒進口、分裝 人血小板生成素(TPO)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 大鼠2,3-二甘油酸(2,3-DPG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 Tergitol-7瓊脂 英文名稱：Tergitol-7 Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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