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微核分析/遺傳毒性分析熒光染料
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產(chǎn)品型號(hào):
產(chǎn)品報(bào)價(jià):
產(chǎn)品特點(diǎn):
微核分析/遺傳毒性分析熒光染料公司正在出售的產(chǎn)品:0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Cathelicidin antimicrobial peptide 78-5000 pg/mL 人腫瘤壞死因子配合基超家族成員18(TNFSF18)ELISA試劑盒 78-5000 pg/mL 人/蘇蛋白激mTOR(Serine/threonine-protein kinase
  微核分析/遺傳毒性分析熒光染料的詳細(xì)資料:

中文名稱(chēng):微核分析/遺傳毒性分析熒光染料

英文名稱(chēng):

產(chǎn)品規(guī)格:10mg

產(chǎn)品貨號(hào):BJ-01X6413

微核分析/遺傳毒性分析熒光染料(DAPI)是一種藍(lán)色核酸染料,優(yōu)先染dsDNA,表現(xiàn)為可集中結(jié)合在DNA 雙鏈的AT 小溝,結(jié)合后的熒光會(huì)發(fā)生20 倍增強(qiáng)。同時(shí),也可以結(jié)合RNA,與DNA 不同,一般認(rèn)為DAPI 染料結(jié)合于RNA 的AU 區(qū)。DAPI/RNA 的復(fù)合體(500nm)有比染料與dsDNA 復(fù)合體(460nm)更長(zhǎng)的熒光波長(zhǎng)。DAPI 是一種常用的多色熒光技術(shù)中的核復(fù)染劑。他的藍(lán)色熒光可以與綠色、紅色、橙黃色探針形成鮮明對(duì)比。

根據(jù)操作說(shuō)明使用,染料的背景可以很低,幾乎沒(méi)有細(xì)胞質(zhì)的背景標(biāo)記。DAPI 可以用在多種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中,如細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、直接或間接地基于抗體的免疫熒光分析以及mRNA 表達(dá)的原味雜交或者與特定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)熒光試劑進(jìn)行共染。DAPI 也可以用來(lái)分析多色流式細(xì)胞術(shù)中。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。


QQ截圖20220509112004.png

細(xì)胞培養(yǎng)方法:

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

Pseudomonas syringae pv. maculicola丁香假單胞桿斑點(diǎn)致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Eperythrozoon lirei山羊附紅  體(山羊嗜血支原體)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用) 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Adenovirus(AV)腺病毒B型LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Spora lygodii海金沙探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

Radix trichosanthis天花粉LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

Squama manis穿山甲探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

Human Herpesvirus-7(HHV-7)人皰疹病毒7型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Nematodirus spathiger匙狀*毛樣線蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Avian Pneumovirus(APV)禽肺病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Culicoides spp.庫(kù)蠓通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Pasteurella multocida多殺巴斯德探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC) 禽致病性大腸桿O1血清型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

微核分析/遺傳毒性分析熒光染料細(xì)胞CASPASE-5蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒  10/50 次

酵母5-羥色胺-N-乙?;D(zhuǎn)移(Serotonin N-Acetyltransferase)活性  20次

純化線粒體蛋白氧化(羰基化;carbonyl)比色法測(cè)定試劑盒  20次

細(xì)胞環(huán)氧化(CYCLOOXYGENASE-1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒  20次

PAR-2(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)  100微克

IKB-ALPHA蛋白免疫共沉淀分析試劑盒  5次

軟瓊脂細(xì)胞克隆試劑盒  10/20次

NGKG寒天基礎(chǔ)培地 英文名稱(chēng):NGKG Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g

細(xì)胞半胱蛋白-9(CASPASE-9)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒  20次

組織甘油三酯(triglyceride)含量連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法  20次

石蠟切片組織CASPASE-5蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒  10/20次

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

 


產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 微核分析 遺傳毒性分析 熒光染料
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