培養(yǎng)操作步驟 ： 1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 產(chǎn)品參數(shù)： 中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) | CCK-8法細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱(chēng) | 500T | BJ-01X6388 |
商品詳細(xì)介紹： 此試劑盒是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無(wú)放射性的比色檢測(cè)法。實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它如MTT, XTT 或MTS 高。由于新型細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液相當(dāng)穩(wěn)定，并且對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，可直接加入到細(xì)胞樣品中長(zhǎng)時(shí)間孵育。 操作方法 1. 96 孔板加入細(xì)胞100μL/孔（約1×104），置37℃ 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時(shí)。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃，含5% CO2 空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4. 向各孔中加入10 μl 的新型細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液。 5. 37℃下孵育1～4 小時(shí)。 6. 酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度。 結(jié)果分析 1. 細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加新型細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加新型細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)溶液，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100 2. 求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告： 一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明： 1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點(diǎn)： 1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 Ovine Astrovirus 2(OAstV)綿羊星狀病毒2型RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Thecaphora solani馬鈴薯黑粉病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Tarsonemus spp.跗線(xiàn)螨屬通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Flos campsis凌霄花染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Cotton Leaf Curl Virus(CLCuV)棉花曲葉病毒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Bovine Cytomegalovirus(BCMV)牛巨 病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 香菇源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測(cè) 50次 低溫 負(fù)20度 一年 3-4周 Influenza Virus A甲型流感（）病毒N2亞型RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Chlamydia pneumoniae肺炎衣原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Alternaria spp.交鏈孢霉屬通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Bluetongue Virus(BTV)藍(lán)舌病病毒8型探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 CCK-8法細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白（MMP-1）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次 冰凍切片脂質(zhì)過(guò)氧化物反式十八碳四烯酸（cis-parinaric acid）熒光染色試劑盒 10次 線(xiàn)蟲(chóng)β-半乳糖苷化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑盒 20次 石蠟切片組織RyR受體蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次 酵母鎂離子濃度反應(yīng)光譜法定量檢測(cè)試劑盒 20次 含250mlPreston肉湯均質(zhì)袋(雙料) 英文名稱(chēng)： 產(chǎn)品規(guī)格：250ml/袋*10 液體雙抗增菌液 英文名稱(chēng)：Liquid Double Anti Bacteria 產(chǎn)品規(guī)格：250g 中國(guó)藍(lán)瓊脂 英文名稱(chēng)：China Blue Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 冰凍切片組織鈣ATPSERCA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次 測(cè)定培養(yǎng)基 英文名稱(chēng)：Folic Acid Assay Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 通用抗原修復(fù)處理試劑盒 50次 |
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