運輸和保存: 視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。 1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。 產(chǎn)品名稱 | 人肺大靜脈內(nèi)皮細胞說明書 | 英文名稱 | Human pulmonary vein endothelial cells | 規(guī)格 | 5×105cells |
培養(yǎng): 1.取出小鼠后瀝干酒精,放入超凈臺內(nèi),固定在泡沫板上。 2.用鑷子提起皮膚,用解剖剪剪開皮膚一個橫切口,將皮膚向上撕開,然后剪開肌肉等,暴露出腹腔,在左側(cè)找到脾臟,用彎頭眼科鑷取出脾臟,置于無菌培養(yǎng)皿中。 3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次,并剔除多余無用的組織。 4.將篩網(wǎng)置于平皿中,脾臟置于篩網(wǎng)上,用彎頭鑷鑷住,輕輕在篩網(wǎng)上進行碾磨,同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。 5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中,離心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。 6.加入10ml培養(yǎng)液,吹打混勻,取樣計數(shù)。 7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中,輕輕搖晃混勻,在培養(yǎng)瓶上。 ? 細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 操作流程: 1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。 1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存: 1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。 1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。 1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。 1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。 1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) =計算貼壁率。 1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線。 葉 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;100mg 化DNA依賴性蛋白激酶抗體 SIGLEC10 ELISA Kit 唾液結(jié)合Ig樣凝集素10(SIGLEC10)ELISA試劑盒 尼麥角林(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:含量測定 Nicergoline 中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii異常漢遜酵母 Hansenula anomala 馬來二酯(>98%,BR) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR Diethyl maleate 大鼠主動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL (R)-(+)-1-(>98.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) (R)-(+)-1-Phenylethyl Alcohol 人直腸粘膜上皮細胞*培養(yǎng)基100mL 原堿 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial G蛋白α抑制蛋白1抗體 Anti-PL12 ELISA Kit 人抗PL12抗體(Anti-PL12)ELISA試劑盒 (-)-香樹脂酚-4-O-β-D- 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg/支 視網(wǎng)膜母細胞瘤結(jié)合蛋白8抗體 TRACP-5b ELISA Kit 人抗酒石性酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒 遼東楤木皂苷Ⅹ;Araloside X 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg EFHC1蛋白抗體 Grb10 ELISA Kit 生長因子受體結(jié)合蛋白10(Grb10)ELISA試劑盒 訶子林鞣 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥96%,標準品 Chebulinic acid 芽胞菌 Bacillus sp.熒光假單胞菌 Pseudomonas fluorescens 五味藤 訂購|咨詢 規(guī)格: 0.5g 熱休克蛋白β7抗體 ERα ELISA Kit 雌激素受體α(ERα)ELISA試劑盒 氟馬西尼/氟馬澤尼(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標準品 Flumazenil 游離生物素測定培養(yǎng)基/Free Biotin Assay Medium嬰兒食品和粉中游離生物素測定250克國產(chǎn)/進口 噴妥 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg 糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2抗體 MSE ELISA Kit 肌特異性化酶(MSE)ELISA試劑盒 阿托伐他汀內(nèi)酯 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 Atorvastatin Lactone Sf-21(昆蟲細胞)5×106cells/瓶×2 鹽米托蒽醌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP,可用于細胞培養(yǎng) Mitoxantrone HCl 弧菌顯色培養(yǎng)基選擇性添加劑凍干試劑 規(guī)格: 10支 用途: 每支添加于100ml(CRM008)弧菌顯色培養(yǎng)基中。 人肺大靜脈內(nèi)皮細胞說明書PKMYT1 髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激酶抗體 規(guī)格: 0.1ml Rabbit Anti-human IgG/Cy3 Cy3標記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml phospho-MAP3K7IP1(Thr431) 磷酸化轉(zhuǎn)化生因子β活化激酶結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml BCAT2/BCAM 支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶2抗體 規(guī)格: 0.1ml CD158e NK細胞抑制性受體3DL1抗體 規(guī)格: 0.2mlPCDHGC5 原鈣粘蛋白γC5抗體 規(guī)格: 0.2ml Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/FITC FITC標記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格: 0.1mlDPH2 白喉酰胺生物合成樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml Phospho-TrkA (Tyr674/675)/TrkB (Tyr706/707) 磷酸化酪氨酸激酶A抗體 規(guī)格: 0.1mlFSP/Spastin 纖維母細胞表面蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml C10orf30/BEND7 10號染色體開放閱讀框30抗體 規(guī)格: 0.2mlCDC34B/UBC3B 泛素載體蛋白R2抗體 規(guī)格: 0.2ml Lubricin/SZP 淺表層粘膜蛋白多糖抗體 規(guī)格: 0.2mlUVRAG/DHTX 輻射耐受相關(guān)蛋白DHTX抗體 規(guī)格: 0.2ml Phospho-Tie2 (Ser1119) 磷酸化管生成素受體2抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-RIP2 (Ser176) 磷酸化受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體 規(guī)格: 0.1ml Cyclin B1 周期素B1抗體 規(guī)格: 0.1mlMaspin 抑基因抗體 規(guī)格: 0.1ml CDC37 Hsp90輔助伴侶分子CDC37抗體 0.1mlCyclin G 周期素G抗體 規(guī)格: 0.1ml Goat Anti-human IgM/Bio 生物素標記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-human sIgA/RBITC 羅丹明標記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格: 0.1ml phospho-RUNX1(Ser266) 磷酸化急性髓細胞白病1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlER-Alpha 雌激素受體α抗體 規(guī)格: 0.1ml 實驗事項: 1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。 2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。 3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。 4. 洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數(shù)。 5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。 6. 反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。 7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準確性。 如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。 |