細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 中文名稱:HDAC抑制劑(Entinostat) 英文名稱:Entinostat 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X7157 英文名稱:Entinostat 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg Entinostat是I型選擇性的HDAC抑制劑,作用于HDAC1,HDAC2和HDAC3,IC50分別為243nM,453nM和248nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :209783-80-2 別名:MS-275;SNDX-275 純度:98.29% 分子量:376.41 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) Staphylococcus warneri沃氏葡萄球探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MCT1 單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Histone H3 (Ser10) 磷酸化組蛋白H3抗體 規(guī)格: 0.1ml Herba houttuyniae魚腥草探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SUGT1 SUGT1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlTBX3 轉(zhuǎn)錄因子Tbx3抗體 規(guī)格: 0.2ml Egg Drop Syndrome Virus-1976(EDSV-76)雞減蛋綜合征病毒-1976LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周EGR3 早期生反應(yīng)蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlDVL2 蓬亂蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml Brucella spp.布魯氏桿屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周G protein beta 3/GNB3 G蛋白β3抗體/核苷酸結(jié)合蛋白β亞基3 規(guī)格: 0.2mlLOXL4 賴氨酰氧化樣蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml Proteus penneri彭氏變形染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周BAFFR/CD268 B細胞活化因子受體抗體 規(guī)格: 0.2mlENPP3/CD203c ENPP3抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml 腰果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周WNT12/WNT10B 信號通路WNT10B抗體 規(guī)格: 0.1mlCA II/Carbonic anhydrase 2 碳酸酐2抗體 規(guī)格: 0.1ml Theileria mutans突變泰勒蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HDC L-組脫羧抗體 規(guī)格: 0.1mlNDUFS1/NADH dehydrogenase (ubiquinone) FeS protein 1 (75kD) 線粒體復(fù)合物NDUFS1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml Tomato Blackring Virus(TBRV)番茄黑環(huán)病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Urocortin 尿皮質(zhì)素抗體 規(guī)格: 0.2mlGABABR1 gamma氨基丁酸B型受體1抗體 規(guī)格: 0.2ml Semen lepidii葶藶子PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-PAK6(Ser165) 磷酸化P21蛋白激活的蛋白激6 規(guī)格: 0.1mlAnei-ATX/Autotaxin 自分泌運動因子抗體 規(guī)格: 0.1ml Porcine rotavirus 豬輪狀病毒通用RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周SYVN1 滑膜細胞凋亡抑制物1抗體 規(guī)格: 0.1mlPAFR/PTAFR 小板活化因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml HDAC抑制劑(Entinostat)人E(VE)免疫試劑盒進口、組裝 魚金屬硫蛋白(MT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 白D(IgD)免疫試劑盒進口、分裝 半固體營養(yǎng)瓊脂 英文名稱:Semisolid Nutrient Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人解脲脲原體抗體(UU-Ab)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 抗生素檢定培養(yǎng)基8號 英文名稱:Antibiotic Agar NO.8 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人膽酸(Cholic acid)免疫試劑盒*直銷 HBI腸桿菌科細菌生化鑒定條(GB) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:5條/盒 人G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)免疫試劑盒進口、組裝 豬雌激素(E)免疫試劑盒進口、組裝 牛(FA)免疫試劑盒*直銷
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