操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:EZH2抑制劑(GSK343) 英文名稱:GSK343 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X7206 英文名稱:GSK343 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg GSK343是一種高效的選擇性EZH2抑制劑,IC50為4nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :1346704-33-3 純度:99.58% 分子量:541.69 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Coccidioides posadasii波薩達斯球孢子探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FBXO42 FBXO42蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml Canine respiratory coronavirus, CRCoV(CRCoV)犬呼吸道病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負20度 一年 2-4周PPIA/Cyclophilin A 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIA抗體 規(guī)格: 0.1ml Porcine Reovirus豬呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HDL 高密度脂蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml Russian Spring-summer Encephalitis Virus俄羅斯春夏腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NPR2L/G21 protein G21蛋白質(zhì)抗體 規(guī)格: 0.2ml Pseudomonas gladioli唐菖蒲假單胞PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周BTNL8 嗜脂蛋白樣8抗體 規(guī)格: 0.2ml Radix achyranthis bidentatae牛膝PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CARD8 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 規(guī)格: 0.1ml Aspergillus fumigatus煙曲霉LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Bad 相關(guān)死亡促進因子Bad抗體 規(guī)格: 0.1ml Leptospira interrogans問號鉤端螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ANKRD33B 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白33B抗體 規(guī)格: 0.2ml Radix ginseng人參PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CTn1/Troponin I/TNNC1 心肌肌鈣蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-human IgG/Bio 標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml Streptococcus equi subspecies equi馬鏈球馬亞種LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-horse IgG 兔抗馬IgG 規(guī)格: 1mgTLK2 絲/蘇激TLK2抗體 規(guī)格: 0.2ml EZH2抑制劑(GSK343)兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫試劑盒*直銷 大鼠化糖原合成激3(pGSK-3)免疫試劑盒進口、分裝 人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠白介素18(IL-18)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人糖脂抗體(glycolipid)免疫試劑盒*直銷 鴨免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒*直銷 人流感A病毒(FluA)抗體(IgM)免疫試劑盒進口、組裝 玉米粉瓊脂 英文名稱:Corn Meal Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人激肽釋放8(KLK 8)免疫試劑盒進口、分裝 鹽瓊脂(USP) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人雌激素受體β(ESR2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
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