產(chǎn)品參數(shù): 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 | 革蘭氏菌染色鑒定試劑盒(Brown-Brenn) | Brown-Brenn Staining Kit | 100次 | BJ-01X6674 |
商品詳細(xì)介紹: 產(chǎn)品特點: 1. 操作簡單、染色穩(wěn)定。 2. 適用范圍廣,可以用于各種石蠟組織切片的染色。 3. 本試劑盒至少可以染色100 張切片。 保存條件:常溫,有效期一年。 |
實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明: 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點: 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。 改良緩沖蛋白胨水(MBP) Modified Buffered Peptone Water 250g 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Biopterin Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ) Baird-Parker Agar Base 250g進(jìn)口、國產(chǎn)500毫升含胺 2 ug pGAS-TA-Luc pGAS-TA-Luc 低溫運(yùn)輸,-20℃保存克氏雙糖鐵瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Kilgler Iron Agar250克細(xì)菌復(fù)合生化試驗 瓊脂粉(組培專用) 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Vitamin A 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬(mLST-Vm) Modified lauryl sulfate tryptose vancomycin medium 250g 0.312-20 ng/mL 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒 培養(yǎng)基B(EP標(biāo)準(zhǔn)) 250g 10 mg 5-Carboxyfluorescein succinimidyl ester Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 7.8-500 pg/mL 鴨瘟病毒(DPV)核酸檢測試劑盒 0.1mg 山羊抗兔IgG,熒光素555標(biāo)記 Goat Anti-Rabbit IgG ,IF555 Conjugate 4℃保存 78-5000 pg/mL 人酐4ELISA試劑盒 100mL BES Buffer,0.5M,pH7.0 BES Buffer,0.5M,pH7.0 常溫保存 0.78-50 ng/mL 人谷草轉(zhuǎn)氨(GOT2)ELISA試劑盒 MRS瓊脂 MRS Agar 250g 50 T ATP測試盒(組織及膜不需高速離心) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人鈣粘蛋白5 (Cadherin-5) ELISA試劑盒 革蘭氏菌染色鑒定試劑盒(Brown-Brenn)牛α乳清蛋白(α-La)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 小鼠還原型甘肽(GSH)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 猴環(huán)鳥苷(cGMP)免疫試劑盒*直銷 豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠前列腺素E代謝物(PGEM)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 山羊CD14分子(CDl4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 大鼠促卵泡素(FSH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人細(xì)胞凋亡相關(guān)斑點樣蛋白(PYCARD)免疫試劑盒*直銷 魚褪黑素(MT)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2/ANX2/ANX2L4/CAL1H/LPC2D)抗體免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽瓊脂 英文名稱:Desoxycholate Citrate Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g |