培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 

產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細(xì)介紹：

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實驗要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

人 RELL2 基因全長ORF克隆人細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 NCR1 基因全長ORF克隆人細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CNPY2 基因全長ORF克隆人細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒*直銷

人 SIRPB1 基因全長ORF克隆人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 PRRG2 基因全長ORF克隆人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CagA)抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 CGB 基因全長ORF克隆人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CagA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 MMRN2 基因全長ORF克隆人細(xì)胞凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(PYCARD)免疫試劑盒*直銷

人 TNS4 基因全長ORF克隆人硒結(jié)合蛋白1(SELENBP1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 SIGLEC10 轉(zhuǎn)錄變體3 基因全長ORF克隆人硒蛋白P(SEPP1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 GALNT2 基因全長ORF克隆人戊型肝炎病毒抗體(IgM)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 PODNL1 基因全長ORF克隆人戊型肝炎病毒抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷

MTH1(NUDT1)抑制劑（TH287）angiotensin II和endothelin A受體雙重抑制劑(Sparsentan)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  Sparsentan40uL×4 雙脫氧dNTP溶液（10mM） ddNTP Solution -20℃保存

LOXL2抑制劑（LOXL2-IN-1 hydrochloride）  1mL(10mM)|100mg  LOXL2-IN-1 hydrochloride2 ug pLLP-STII pLLP-STII 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

PPARα激動劑(GW7647)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg  GW7647羽絨羽毛微生物檢驗  

VEGFR2激酶抑制劑(SU5408)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg  SU54081瓶 MV3細(xì)胞株 MV3 低溫運(yùn)輸和保存

adenylate cyclase抑制劑(CB-7921220)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg  CB-7921220Voges-Proskauer(V-P)試劑 V-P Box 5ml*4

Na+/H+交換抑制劑（Eniporide hydrochloride）  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg  Eniporide hydrochloride1g 洋紅 Carmine 室溫干燥避光保存

HIF hydroxylase抑制劑(Desidustat)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Desidustat1000mL Tris Buffered Saline(TBS),10X  Tris Buffered Saline(TBS),10X  常溫保存

thrombin受體激動劑(Sfllrnpndkyepf)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg  Sfllrnpndkyepf10mL Sephacryl S-400基質(zhì) Sephacryl S-400 4℃保存

Lck抑制劑(RK-24466)  1mL(10mM)|1mg|5mg  RK-244662 ug pTetOne pTetOne 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

KCa3.1激活劑(SKA-121)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  SKA-12150支   Oral Swab 常溫

apelin受體激動劑（[Pyr1]-Apelin-13）  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg  [Pyr1]-Apelin-132 ug pDsRed2.1 pDsRed2.1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存