操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：GE Ficoll-Paque PLUS淋巴細胞分離液 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：100ml 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6554 Ficoll-Paque PLUS是經(jīng)驗證可在實驗室廣泛應用的人淋巴細胞分離液，分離人淋巴細胞用于體外研究。Ficoll-Paque PLUS是一種即開可用的無菌分離液，優(yōu)化的分離液密度可從周圍血液中獲得高產(chǎn)率的淋巴細胞，并可以維持B淋巴細胞和T淋巴細胞的生長和分布。低水平內(nèi)毒素含量(<0.12 EU/ml)。Ficoll-Paque PLUS培養(yǎng)基包含聚蔗糖(Ficoll PM400, 5.7g)，二乙酰氨基三碘(9.0g)和乙底酸鈣二鈉。產(chǎn)品可應用于組織相容性試驗，細胞介導免疫檢測等。#17-1440-02 Ficoll-Paque PLUS為6瓶裝，每瓶100ml。 檢測原理：去纖維蛋白或抗凝血劑處理的血液在Ficoll-Paque PLUS分離液中分層，離心分離后，管底部含有聚集的紅細胞，紅細胞層上面一層含有大量粒性白細胞，而淋巴細胞停留在血漿和Ficoll-Paque PLUS界面處(同時含有沉淀微粒血小板和單核細胞)?；厥战缑嫣幜馨图毎?，用清洗去除血小板、Ficoll-Paque PLUS分離液和血漿。 保存溫度：4-30℃ 應用： 細胞分離 產(chǎn)品特性： 物理狀態(tài)：無色液體 大密度：1.078 g/ml pH范圍：5.5-7.5 內(nèi)毒素活性：< 0.12 EU/ml 從人周圍血液中分離淋巴細胞 保質(zhì)期：3年 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Vancomycin-Resistant Enterococcus(VRE)耐萬古腸球vanA/vanB雙重LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Streptococcus mutans變異鏈球探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Infectious Laryngotracheitis Virus(ILTV)雞傳染性喉氣管炎病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Babesia spp.巴貝斯屬蟲通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Semliki Forest Virus(SFV)塞姆利基森林病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 鹿源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周 Radix linderae染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Varroa jacobsoni雅氏瓦螨LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Tobacco Ringspot Virus(TRSV)煙草環(huán)斑病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Clostridium histolyticum溶組織梭狀芽孢桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fasciola magna大擬片形吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 GE Ficoll-Paque PLUS淋巴細胞分離液人動力蛋白輕鏈1,細胞質(zhì)(DYNLL1/DLC1/DNCL1/DNCLC1/HDLC1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 1%NaCl甘露糖 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支 人RNA結(jié)合蛋白FUS(FUS/TLS)免疫試劑盒*直銷 豬基質(zhì)細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)免疫試劑盒*直銷 犬白介素1(IL-1)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠熱休克蛋白27(HSP-27)免疫試劑盒進口、分裝 雞血管內(nèi)皮細胞生長因子B(VEGF-B)免疫試劑盒*直銷 小鼠白介素2受體β(IL2rb/CD122)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 大鼠血紅素氧合1(HO-1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 兔子γ干擾素(IFN-γ)免疫試劑盒進口、分裝 大鼠堿性(ALP)免疫試劑盒*直銷
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