細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 中文名稱:Pim1/2和3激酶抑制劑(CX-6258) 英文名稱:CX-6258 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X8157 CX-6258是Pim1,2和3激酶抑制劑,IC50為5nM,25nM和16nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :1202916-90-2 純度:99.13% 分子量:461.94 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 人 EPHA7 基因全長ORF克隆人脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原(PV)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 CDC73 基因全長ORF克隆人脊髓灰質(zhì)炎病毒(PV)抗體(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 TREML2 基因全長ORF克隆人己糖激3(HK3)免疫試劑盒*直銷 人 AIM2 基因全長ORF克隆人己糖激(HK)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 FOXP3 基因全長ORF克隆人幾丁質(zhì)3樣蛋白1(YKL-40/CHI3L1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 CLEC2D 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆人幾丁質(zhì)1(殼三糖)(CHIT1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 IDO1 基因全長ORF克隆人集蛋白亞家族成員11(COLEC11)免疫試劑盒*直銷 人 JAG1 基因全長ORF克隆人極低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 CTHRC1 基因全長ORF克隆人激肽釋放8(KLK 8)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 ADM 基因全長ORF克隆人激肽釋放7(KLK 7)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 FPR3 基因全長ORF克隆人激肽釋放6(KLK 6)免疫試劑盒*直銷 Pim1/2和3激酶抑制劑(CX-6258)MAO抑制劑(Modaline sulfate) 1mL(10mM)|100mg Modaline sulfate50mL Aluminum Chloride Solution(氯化鋁溶液),0.5M Aluminum Chloride Solution,0.5M 常溫保存 前列腺素G/H合酶1/2抑制劑 5g|10g Bismuth Subsalicylate100g DNPVP K30(聚乙烯咯烷酮K30) 鈣離子通道變構(gòu)抑制劑 1mL(10mM)|100mg Tetracaine hydrochloride2 ug pG5-Luc pG5-Luc 低溫運輸,-20℃保存 mAChR激動劑 1mL(10mM)|1mg|5mg (+)-Cevimeline hydrochloride hemihydrate染色液試劑盒產(chǎn)品系列 LRRK2抑制劑(GNE-7915 tosylate) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg GNE-7915 tosylate1g D- ( H) D-Biotin 4℃保存 GABA氨基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(Vigabatrin Hydrochloride) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg Vigabatrin Hydrochloride500mL Tris-HCl Buffer,2.0M,pH7.4 Tris-HCl Buffer,2.0M,pH7.4 常溫保存 VMAT-2抑制劑(Tetrabenazine Racemate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Tetrabenazine Racemate1mL 哺乳動物蛋白抑制劑 Protease Inhibitor for Mammal -20℃保存 TRPA1激活劑(Podocarpic acid) 1mL(10mM)|10mg|50mg Podocarpic acid2 ug pTrx-SUMO pTrx-SUMO 低溫運輸,-20℃保存 GABA激動劑 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Remimazolam benzenesulfonate1次 97孔板血液DNAout(離心) PDE1抑制劑(PDE1-IN-2) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg PDE1-IN-22 ug pEF4/V5-His A pEF4/V5-His A 低溫運輸,-20℃保存 mAChR高效抑制劑(mAChR-IN-1) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg mAChR-IN-1LBS瓊脂 LBS agar 250g
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