培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí); 4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 產(chǎn)品參數(shù): 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) | VEGFR2抑制劑(BFH772) | BFH772 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg | BJ-01X8394 |
商品詳細(xì)介紹: BFH772是一種有效的VEGFR2抑制劑,IC50為3nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :890128-81-1 純度:98.03% 分子量:439.39 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明: 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點(diǎn): 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 小鼠 ASGR1 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 小鼠 CD249 / ENPEP 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 小鼠 ITGB3 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)免疫試劑盒*直銷 小鼠 CCL4 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 小鼠 ALK-3 / BMPRIA 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 小鼠 FRZB / FIZ 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒細(xì)胞膠原(MMP-8/Collagenase II)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 小鼠 IL11RA1 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白7(MMP-7)免疫試劑盒*直銷 小鼠 CD200 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 小鼠 IL18 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 小鼠 IL17C 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 小鼠 CXCL2 / MIP-2 基因全長ORF克隆大鼠基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒*直銷 VEGFR2抑制劑(BFH772)250mL Nylon Membrane Stripping Buffer,10X(尼龍膜剝離緩沖液,10X) Nylon Membrane Stripping Buffer,10X 常溫保存 致瀉大腸埃希氏菌生化套裝 8種*2套/盒 2 ug pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP(380) pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP(380) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 麥芽浸膏湯 Malt Extract Broth 200g 100g α- 乳糖 α-Lactose 室溫干燥保存 50T 麻風(fēng)桿菌PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 5mL 尿道上皮細(xì)胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 100mL AMPSO Buffer,0.2M,pH9.0 AMPSO Buffer,0.2M,pH9.0 常溫保存 50次 DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)(50-500bp) DNAMETER 4℃保存 2 ug SD1211- 2 SD1211- 2 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 抗生素檢定培養(yǎng)基4號(hào)(PH6.5-6.6) Antibiotic Agar No.4 250g
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