操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:HMG-CoA還原酶(HMGCR)抑制劑(Mevastatin) 英文名稱:Mevastatin 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X7854 Mevastatin(Compactin;ML236B)抑制HMG-CoA還原酶(HMGCR),可抑制類異戊二烯的生物合成,阻斷蛋白的異戊二烯化,降低血漿水平。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :73573-88-3 別名:Compactin;ML236B 純度:98.56% 分子量:390.51 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 丹酚酸D 英文名: Salvianolic acid D 英文別名: (alphaR)-alpha-[[(2E)-3-[2-(Carboxymethyl)-3,4-dihydroxyphenyl]-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4-dihydroxybenzenepropanoic acid CAS登錄號: 142998-47-8 分子式: C20H18O10 丹酚酸C 英文名: Salvianolic acid C 英文別名: (alphaR)-alpha-[[(2E)-3-[2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-7-hydroxy-4-benzofuranyl]-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4-dihydroxybenzenepropanoic acid CAS登錄號: 115841-09-3 分子式: C26H20O10 三七皂苷R2(R型) CAS登錄號: 新品待定 分子式: C41H69O13 分子量: 871.01 分子結(jié)構(gòu): 三七皂苷Ft1 CAS登錄號: 新品待定 分子式: C47H80O17 分子量: 917.13 分子結(jié)構(gòu): 苯甲酰次烏頭原堿 英文別名: Benzoylhypaconine CAS登錄號: 63238-66-4 分子式: C31H43NO9 分子量: 573.29 次烏頭原堿 CAS登錄號: 新品待定 分子式: C24H39NO8 分子量: 469.57 分子結(jié)構(gòu): 新烏頭原堿 CAS登錄號: 6792-09-2 分子式: C24H39NO9 分子量: 485.57 分子結(jié)構(gòu): 28-去甲基-β-香樹脂酮 CAS登錄號: 新品待定 分子式: C29H46O 分子量: 410.67 分子結(jié)構(gòu): 長春瑞濱 英文名: Vinorelbine 英文別名: 5-Noranhydrovinblastine; NVB;Kw-2307;(2β,3β,4β,5α,12R,19α)-4-(Acetyloxy)-6,7-didehydro-15-[(2R,6R,8S)-4-ethyl-1,3,6,7,8,9-hexahydro-8-(methoxycarbonyl)-2,6-methano-2H-azecino[4,3-b]indol-8-yl]-3-hydroxy-16-methoxy-1-methyl-aspidospermidine-3-carboxylic acid, methyl ester CAS登錄號: 71486-22-1 分子式: C45H54N4O8 長春新堿 英文別名: 22-oxo-vincaleukoblastine CAS登錄號: 57-22-7 分子式: C46H56N4O10 分子量: 824.96 酒石酸長春質(zhì)堿 英文別名: ;(2alpha,5beta,6alpha,18beta)-3,4-Didehydroibogamine-18-carboxylic acid methyl ester (2R,3R)-2,3-dihydroxybutanedioate CAS登錄號: 4168-17-6 分子式: C25H30N2O8 分子量: 486.51 HMG-CoA還原酶(HMGCR)抑制劑(Mevastatin)線粒體超氧化物染色試劑盒-M13 30T|50T 2 ug pFastBac1-Gus pFastBac1-Gus 低溫運輸,-20℃保存 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(藍(lán)色熒光) 125T|250T 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)(2015藥典) Sabouraud Dextrose Agar 250g 高爾基體G01綠色熒光染色試劑盒 30T 1瓶 C6細(xì)胞株 C6 低溫運輸和保存 溶酶體染色試劑盒(綠色熒光)-L01 250T|500T 大腸桿菌/大腸菌群顯色培養(yǎng)基(第二代) E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 1000(ML) 溶酶體染色試劑盒(紅色熒光)-L03 500T|1000T 300U T7 DNA 聚合(未修飾) T7 DNA Polymerase(unmodified) -20℃保存 溶酶體染色試劑盒(黃色/藍(lán)色熒光)-L05 125T|250T 500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH6.8 Phosphate Buffer,0.2M, pH6.8 常溫保存 細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒-C01 500T 0.1mL×10 BL21(DE3)pLysS化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 BL21 (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存 Ca2+鈣離子染色試劑盒(Fluo-3,AM法) 50T|100T 250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.0 MOPS Buffer,1.0M,pH7.0 常溫保存 細(xì)胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01 1000T|5000T 1/2MS培養(yǎng)基 1/2MS Medium 250g 細(xì)胞膜染色試劑盒(橙色熒光)-M03 1000T|5000T 1瓶 U-2 OS-Luc teT-on細(xì)胞株 U-2 OS-Luc teT-on 低溫運輸和保存 細(xì)胞骨架染色試劑盒-C12 500T M-肉湯 M-Broth 250g
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