操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:抗酸染色液(金胺O熒光法) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:4×100ml 產(chǎn)品貨號:BJ-01X6918 用途: 抗酸菌(結(jié)核桿菌等)染色,可鑒別抗酸菌與非抗酸菌 注意事項: 熒光顯微鏡下抗酸菌呈亮黃色,非抗酸桿菌和背景呈暗黃色。主要由金胺O染色液、脫色液、復(fù)染液組成。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 White Spot Syndrome Virus(WSSV)白斑綜合癥病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周SynCAM 細胞粘附分子1抗體 規(guī)格: 0.1ml Southern Bean Mosaic Virus(SBMV)南方菜豆花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Batroxobin Protein 蛇毒巴曲抗體 規(guī)格: 0.2ml Rhizoma dioscoreae山藥PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SIRT5 沉默調(diào)節(jié)蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Europe Strain (PRRSV Europe)豬生殖與呼吸綜合癥病毒歐洲株RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周VAPB 囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)的蛋白B 規(guī)格: 0.2ml Trichomonas vaginali陰道毛滴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-rabbit IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml Rhizoma chuanxiong川芎探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周RECK 金屬蛋白抑制因子RECK抗體 規(guī)格: 0.2ml Trichostrongylus axei安氏毛圓線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TRPM4 瞬時受體電位離子通道蛋白4抗體(M亞家族) 規(guī)格: 0.2ml Leucocytozoon sabrezis沙氏住白 原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CD66d/CEAM3 胚抗原相關(guān)細胞粘附分子3抗體 規(guī)格: 0.2ml Radix rubiae茜草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格: 0.1ml Buffalo Pox Virus(BPXV)水牛正痘病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CD184/CXCR4 細胞表面趨化因子受體4抗體 規(guī)格: 0.1ml 抗酸染色液(金胺O熒光法)大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2)免疫試劑盒*直銷 兔熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠胱抑素S(CST4)免疫試劑盒進口、組裝 人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)免疫試劑盒進口、分裝 大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CTX-Ⅰ)免疫試劑盒進口、分裝 人溶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) m-TEC瓊脂 英文名稱:m-TEC Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人抗腎小球基底膜(GBM)抗體免疫試劑盒*直銷 改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基 英文名稱:Modified KIA Iron Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)免疫試劑盒進口、組裝 測定培養(yǎng)基 英文名稱:Folic Acid Assay Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
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