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產(chǎn)品展示
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B-Raf抑制劑(GDC-0879)
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產(chǎn)品報價:
產(chǎn)品特點:
B-Raf抑制劑(GDC-0879)公司正在出售的產(chǎn)品:RHCG RH型C糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlABCD1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗體 0.1mlTSHR 促甲狀素受體抗體 規(guī)格: 0.1mlC1orf144 1號染色體開放閱讀框144抗體 規(guī)格: 0.2mlHEATR7B2 熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
  B-Raf抑制劑(GDC-0879)的詳細資料:

培養(yǎng)操作步驟

1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

產(chǎn)品參數(shù):

中文名稱

英文名稱

產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品貨號

B-Raf抑制劑(GDC-0879)

GDC-0879

1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

BJ-01X7922

商品詳細介紹:

GDC-0879是高活性B-Raf選擇性抑制劑,IC50為0.13nM,與對c-Raf的抑制性接近,對其它的激酶則無抑制活性。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

:905281-76-7

純度:99.70%

分子量:334.37

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

2.png 

實驗要點及說明:

1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;

5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點:

1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。

5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

LCN6 基因全長ORF克隆小鼠前列腺素D2(PGD2)免疫試劑盒進口、分裝

OMP 基因全長ORF克隆小鼠前列環(huán)素(PGI2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

ABCA9 基因全長ORF克隆小鼠前白蛋白(PA)免疫試劑盒*直銷

TNRC6A 基因全長ORF克隆小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)免疫試劑盒進口、組裝

UCN3 基因全長ORF克隆小鼠葡萄糖激(GCK)免疫試劑盒進口、分裝

LMO1 基因全長ORF克隆小鼠葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

GIP 基因全長ORF克隆小鼠葡萄糖6脫氫(G6PD)免疫試劑盒*直銷

FNDC5 基因全長ORF克隆小鼠破傷風(Tetanus)抗體免疫試劑盒進口、組裝

LYZL6 基因全長ORF克隆小鼠破骨細胞分化因子(ODF)免疫試劑盒進口、分裝

EDDM3A 基因全長ORF克隆小鼠蘋果酸脫氫(MDH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

CST8 基因全長ORF克隆小鼠核苷酸化(PNP)免疫試劑盒*直銷

B-Raf抑制劑(GDC-0879)CDK1/CDK2/CDK9抑制劑(AZD-5438)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  AZD-54382 ug pRNATin-H1.2/Neo pRNATin-H1.2/Neo 低溫運輸,-20℃保存

CREBBP/EP300抑制劑(SGC-CBP30)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  SGC-CBP30250次 血液RNAout  Blood RNAOUT 4℃保存

Polo-like kinase1抑制劑  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg  GSK4613642 ug pcDNAhis pcDNAhis 低溫運輸,-20℃保存

小分子Sirtuin1激活劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  SRT 2104野生酵母培養(yǎng)基  250g

(USP7抑制劑(P005091)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  P00509125g 甲叉雙丙烯酰胺 N,N’-Methylene Bisacrylamide(BIS) 室溫干燥保存

Pim1/AKK1/MST2/LKB1抑制劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  Pim1/AKK1-IN-150T 牛瘟病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

αvβ3 integrin抑制劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Cyclo(-RGDfK)25 mg NBD-Cl Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

拓撲異構(gòu)酶抑制劑(Daun02)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg  Daun02500mL Blotto-Tween in PBS with azide   Blotto-Tween in PBS with azide   常溫保存

蛋白酶體抑制劑(MLN2238)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg  MLN223850次 低載量PCR片段純化試劑盒 Mini PCR Clean-Up Kit 常溫保存

Wnt加工和分泌抑制劑(IWP-2)  1mL(10mM)|10mg|50mg  IWP-22 ug pAD43-25 pAD43-25 低溫運輸,-20℃保存

Akt抑制劑(Perifosine)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Perifosine液體連四硫酸鹽培養(yǎng)基 Fluid Tetrathionate Medium 250g

 


產(chǎn)品相關關鍵字: B-Raf 抑制劑
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