培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。 產(chǎn)品參數(shù): 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 | 微管蛋白聚合抑制劑(D-64131) | D-64131 | 1mL(10mM)|10mg|50mg | BJ-01X8452 |
商品詳細介紹: D-64131是微管蛋白聚合抑制劑,能與秋水仙素競爭性結(jié)合αβ-微管蛋白。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :74588-78-6 純度:99.42% 分子量:251.28 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 實驗要點及說明: 1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點: 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。 大鼠 LAMTOR1 基因全長ORF克隆植物E(VE)免疫試劑盒進口、分裝 大鼠 RAB7A 基因全長ORF克隆植物D3(VD3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠 CRCP 基因全長ORF克隆植物D2(VD2)免疫試劑盒*直銷 大鼠 HAAO 基因全長ORF克隆植物D(VD)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠 TNFAIP6 基因全長ORF克隆植物C(VC)免疫試劑盒進口、分裝 大鼠 ATP6V0D1 基因全長ORF克隆植物B6(VB6)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠 PNLIPRP1 基因全長ORF克隆植物B12(VB12)免疫試劑盒*直銷 大鼠 TUBB2A 基因全長ORF克隆植物A(VA)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠 AP2M1 基因全長ORF克隆植物茄呢醇2,葉綠體(SPS2/SPPS)免疫試劑盒進口、分裝 大鼠 DNAJA2 基因全長ORF克隆植物茄呢醇1(SPS1/SPPS/SPS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠 NAPSA 基因全長ORF克隆植物激素脫落酸(ABA)免疫試劑盒*直銷 微管蛋白聚合抑制劑(D-64131)50T 豬痢疾密螺旋體PCR檢測試劑盒 Brachyspira hyodysenteriae PCR Kit 低溫運輸,-20℃保存 200次 ATP發(fā)光法細胞活力檢測試劑盒 ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit -20℃或-80℃避光保存 100mL Kinase Stop Buffer,5X Kinase Stop Buffer,5X 常溫保存 100uL 6nt隨機引物(抗水解) Exo-Resistant Random Primer -20℃保存 2 ug pLVTH pLVTH 低溫運輸,-20℃保存 固氮螺菌培養(yǎng)基 250g 1瓶 NFS-60細胞株 NFS-60 低溫運輸和保存 瓊脂培養(yǎng)基F(紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂) Agar Medium F(Violet Red Bile Glucose Agar) 250g 10g N ,N- 雙 (2- ) Bicine 室溫干燥保存 500mL Tris-HCl Buffer,2.0M,pH7.0 Tris-HCl Buffer,2.0M,pH7.0 常溫保存 10mL 細菌蛋白抑制劑 Protease Inhibitor for Bacteria -20℃保存
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