產(chǎn)品參數(shù): 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 | 細(xì)胞骨架染色試劑盒-C12 |
| 500T | BJ-01X6668 |
商品詳細(xì)介紹: 細(xì)胞骨架(cytoskeleton)是真核細(xì)胞中由蛋白質(zhì)聚合而成的三維的纖維狀網(wǎng)架體系。細(xì)胞骨架包括微絲、微管和中間纖維。細(xì)胞骨架在維持細(xì)胞形態(tài),承受外力、保持細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的有序性方面起重要作用。細(xì)胞骨架肌動蛋白是球形的、大約42kd的蛋白,在幾乎所有的真核細(xì)胞都存在。這是一個非常保守的蛋白,在各物種差異不超過20%。肌動蛋白是兩種細(xì)胞內(nèi)絲狀結(jié)構(gòu)的構(gòu)成單體:微絲(三種主要的細(xì)胞骨架成分之一),以及細(xì)肌絲(是肌肉細(xì)胞收縮復(fù)合物的一部分)。肌動蛋白參與很多重要的細(xì)胞功能,包括肌肉收縮,細(xì)胞移動,細(xì)胞分裂和胞質(zhì)分裂、小泡和細(xì)胞器的運動、細(xì)胞信號,以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形態(tài)的保持和建立。 顯示細(xì)胞骨架的常用方法有兩種:骨架蛋白染色法和免疫熒光染色法。骨架蛋白染色法具有簡單易行的特點,但不能區(qū)分骨架蛋白的組成,有些類型的纖維太細(xì),在光學(xué)顯微鏡下無法分辨,常用于骨架形態(tài)及完整性研究;免疫熒光染色法可特異顯示骨架蛋白,是用一種微絲解聚抑制劑,它與肌動蛋白纖絲有強(qiáng)親和作用,使肌動蛋白纖絲穩(wěn)定,抑制解聚,且只與F-actin 結(jié)合.因此,利用熒光標(biāo)記可以清晰顯示細(xì)胞中微絲的形態(tài),利用熒光顯微鏡對熒光標(biāo)記的細(xì)胞骨架進(jìn)行觀察,可以得到清晰的實驗結(jié)果.具有更普遍的應(yīng)用意義。 儲存條件:染料-20℃避光保存;稀釋液2-8℃保存。 有效期:六個月。 |
實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明: 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點: 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。 溴甲紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基 Bromcresol Purple Dextrose Peptone 250g改良胰蛋白胨大豆肉湯進(jìn)口、國產(chǎn)Modified Tryptic Soy Broth250克大腸桿菌O157選擇性增菌 2 ug pLacZ pLacZ 低溫運輸,-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人腫瘤壞死因子受體超家族成員9 (TNFRSF9)ELISA試劑盒 25mg S(-) 雷氯必利 (+)- 酒石酸鹽 S(-)-Raclopride(+)-Tartrate Salt 室溫保存 9.375-600 pg/mL 人脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)ELISA試劑盒 600次 即用型PCR試劑盒2.0 Instant PCR Kit 2.0 -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人/富有剪接因子2(SRSF2)ELISA試劑盒 1個 痰液采集器 耶爾森氏菌顯色培養(yǎng)基進(jìn)口、國產(chǎn)耶爾森氏菌顯色培養(yǎng)基250克耶爾森氏菌快速顯色分離培養(yǎng) 2 ug pVitro2-neo-mcs pVitro2-neo-mcs 低溫運輸,-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人多聚腺苷二核糖聚合2(PARP-2)ELISA試劑盒 250mL Neutralization Solution Neutralization Solution 常溫保存 100g RNGuSCN (異硫酸胍) 常溫 0.156-10 ng/mL 人白相關(guān)免疫球蛋白樣受體1(LAIR1)ELISA試劑盒 1.5mL DNA堿性膠上樣液,6× DNAoN for Alkaline Gel -20℃保存 100mL TABS Buffer,0.2M,pH8.5 TABS Buffer,0.2M,pH8.5 常溫保存 1.56-100 ng/mL 人干擾素α/β受體2(IFNAR2)ELISA試劑盒 改良Giolitti-Cantobi肉湯 Modified Giolitti-Cantoni Broth 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Arachidonic acid 細(xì)胞骨架染色試劑盒-C12大鼠抵抗素樣α(Retnla)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人纖維蛋白原(Fb)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 植物D3(VD3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人核苷化1(UPP1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基(2015藥典) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人抗表皮細(xì)胞基底膜抗體(EBMZ)免疫試劑盒*直銷 玫瑰紅鈉瓊脂平板(9cm) 英文名稱:Rose Bengal Medium 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包 人端粒重復(fù)序列結(jié)合因子2(TERF2)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 賴脫羧肉湯 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支 人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 豬降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 |