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產(chǎn)品展示
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淋巴細(xì)胞分離液1.077
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產(chǎn)品特點(diǎn):
淋巴細(xì)胞分離液1.077公司正在出售的產(chǎn)品:3.12-200 U/L ELISA Kit for Human Alanine aminotransferase 1 78-5000 pg/mL 人轉(zhuǎn)錄終止因子2(TTF2)ELISA試劑盒 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Homocysteine-responsive endoplasmic reticulum-
  淋巴細(xì)胞分離液1.077的詳細(xì)資料:

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

中文名稱:淋巴細(xì)胞分離液1.077

英文名稱:Lymphocyte Separation Medium 1.077

產(chǎn)品規(guī)格:100ml

產(chǎn)品貨號:BJ-01X6545

淋巴細(xì)胞分離液(Lymphocyte Separation Medium,簡稱LSM)是一種無菌的即用型分離液,基于B?yum的Ficoll-甲泛影鈉溶液做過一些改良,使得操作簡單快速且分離效率更高。每100 ml淋巴細(xì)胞分離液中含有6.2 g 聚蔗糖(Ficoll)和9.4 g 鈉,20℃下的密度為1.0770-1.0800 g/ml。不僅適用于外周血淋巴細(xì)胞,也可分離其他組織來源的淋巴細(xì)胞,包括臍帶血和骨髓細(xì)胞。

工作原理

去纖維蛋白或肝素化人血以1:1的比例用生理鹽水或稀釋,加在分離液上層,之后低速離心30 min。在離心過程中,差速遷移使其終形成幾個細(xì)胞分層。聚集在管底的顆粒主要是紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞,通過梯度遷移至管底。根據(jù)其密度的大小,淋巴細(xì)胞和其他單個核細(xì)胞如單核細(xì)胞,以及血小板分布在血漿和LSM兩層之間。淋巴細(xì)胞可以通過吸取分界層溶液回收,并通過進(jìn)一步清洗來去除血小板,LSM和血漿。


QQ截圖20220509112004.png

細(xì)胞培養(yǎng)方法:

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

Flos mume梅花PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

Corynebacterium pseudotuberculosis偽結(jié)核棒桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Enterovirus(EV)腸道病毒A組探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Cymbidium Ringspot Virus(CymRSV)蘭花環(huán)斑病毒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Influenza Virus A甲型流感()病毒H9亞型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Semen plantaginis 車前子PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

Herba portulacae馬齒莧染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

Caulis spatholobi雞血藤染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

Crinipellis perniciosa可可叢枝病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Herba andrographis蓮染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

Everglades Virus(EVE)Everglades病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周

Ostreid Herpesvirus Type 1(OsHV-1)牡蠣皰疹病毒1型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周

淋巴細(xì)胞分離液1.077兔子基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人游離血紅蛋白(f-Hb)免疫試劑盒*直銷

大鼠VGF神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白(VGF)免疫試劑盒*直銷

人髓過氧化物特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

核苷二激A(NDPK-A)免疫試劑盒*直銷

人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2 抗體 免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱:Potato Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g

人活化蛋白C(APC)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

假單胞分離瓊脂 英文名稱:Pseudomonas Isolation Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g

人補(bǔ)體7(C7)免疫試劑盒*直銷

 


產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 淋巴細(xì)胞 分離液
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