操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:肥大細胞染色液(醛品紅-橙黃G法) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:4×20ml|4×50ml 產(chǎn)品貨號:BJ-01X6696 用途: 肥大細胞脫顆粒染色 注意事項: 肥大細胞呈紫色至深紫色,彈力纖維呈紫色,紅細胞呈橙黃色,其余組織呈淡黃色,其他細胞多不著色。 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 25g L- 天 L-Asparagine 室溫保存LES ENDO瓊脂進口、國產(chǎn)Membrane Endo Agar LES250克膜過濾水中大腸桿菌計數(shù) 50mg 刀豆球蛋白 A Ⅲ Con A Ⅲ 4℃保存 78-5000 pg/mL 人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒 2 ug pBlueScriptR PPP2R5 A pBlueScriptR PPP2R5 A 低溫運輸,-20℃保存 100mL Tricine Buffer,0.5M,pH9.0 Tricine Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存Orchimax培養(yǎng)基(含木炭)進口、國產(chǎn)Orchimax Medium with charcoal10升BR 250mL Acetate Buffer(乙酸緩沖液),1M,pH5.5 Acetate Buffer,1M,pH5.5 常溫保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Erythropoietin receptor 1 管 JM105大腸桿菌 JM105 E.coli Strain -80℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 明膠液化生化管(軍團菌) 20支/盒 50 T 過氧化氫測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 0.312-20 ng/mL 人線粒體Poly(A)核糖核酸聚合(PAP)ELISA試劑盒 250mL Casein Blocking Buffer in TBS(酪蛋白封堵劑) Casein Blocking Buffer in TBS 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人腺苷脫氨CECR1(Adenosine deaminase CECR1)ELISA試劑盒 100μL Ac-DEVD-CHO(Caspase 3抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存吖啶黃素進口、國產(chǎn)每支添加于225ml HB4150、HB4192中(SN、GB標準)3.75mg/支*5 200mL Bradford法蛋白定量試劑盒 Staining Kit for His-Tag -20℃保存 0.625-40 ng/mL 人骨形成蛋白15(BMP-15)ELISA試劑盒 肥大細胞染色液(醛品紅-橙黃G法)人前列腺素E1(PGE1)免疫試劑盒*直銷 氧化試紙 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:10片 人抗菌肽(Attacin)免疫試劑盒進口、組裝 含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆瓊脂(TSA-YE) 英文名稱:Trypticase Soy-Yeast Extract Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)免疫試劑盒進口、分裝 三號膽鹽 英文名稱:No. 3 Bile Salt 產(chǎn)品規(guī)格:100g 人αL巖藻糖苷(AFU)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 豬乳酸脫氫(LDH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 犬結(jié)締組織生長因子(CTGF)免疫試劑盒進口、組裝 小鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)免疫試劑盒進口、組裝 馬A(VA)免疫試劑盒進口、分裝 |