中文名稱：CCCP(50mM) 細胞凋亡誘導劑 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：100μl 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6431 本品是溶于DMSO的CCCP溶液，濃度為50mM，體積為100μl（相當于1mg的總量），常用作一種陽性對照來誘導細胞凋亡，并配合線粒體膜電位檢測探針JC-1（貨號SY0488）或者JC-10（貨號SY0490）來進行相關(guān)研究。 CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一種質(zhì)子載體（H+ ionophore），是一種強效的線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，促使線粒體內(nèi)膜對H+產(chǎn)生通透性，導致線粒體內(nèi)膜兩側(cè)的膜電位喪失，誘導凋亡發(fā)生。也可作用于葉綠體膜，抑制光合作用；CCCP還可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體（ER-Golgi）之間的蛋白轉(zhuǎn)運，高親和力結(jié)合細胞色素氧化酶。 CCCP還具有其他功能： 1）在牛蛙交感神經(jīng)方面的實驗表明，CCCP 可增強促黃體生成素釋放激素的釋放； 2）作為一種質(zhì)子導體在葡萄糖存在的情況下影響E.coli 細胞活性； 3）對細胞內(nèi)鈣水平的各種調(diào)節(jié)效應(yīng)； 4）抑制脂肝酶的分泌； 5）部分抑制pH梯度活化的Cl-攝取以及刷狀緣膜的Cl-/Cl-交換等。 儲存條件：-20℃，有效期12個月 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Tarsonemus spp.跗線螨屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rice Yellow Mottle Virus(RYMV)水稻黃斑駁病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Torque Teno Sus Virus Type 1 (TTSuV-1)豬托克特諾病毒1型（豬細環(huán)病毒1型）染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Duck Astrovirus-1（DAstV-1）鵝星狀病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Influenza Virus A甲型流感（）病毒H10N8亞型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Vibrio harveyi哈維氏弧LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Semen alpiniae katsumadai草豆蔻探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Shovenose Sturgeon Iridovirus(SSIV)白鱘虹彩病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Aeromonas spp.氣單胞通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 乙型流感Victoria/Yamagata亞型（BV/BY)雙重染料法熒光定量PCR試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Babesia motasi莫氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Haplosporidium spp.單孢子蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 CCCP(50mM) 細胞凋亡誘導劑1%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 英文名稱：1% Dextrose Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 脂蛋白脂活性比色法定量檢測試劑盒 20次 細磷脂C（Phospholipase C）活性熒光定量檢測試劑盒 20次 血液5’－核苷酸（5’－NT）活性比色法定量檢測試劑盒 20次 植物氧化應(yīng)激活性氧（ROS）比色法定量檢測試劑盒（羥自由基） 20次 志賀氏菌增菌肉湯-新生 英文名稱：Shigella Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 細胞CREB蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 10/50 次 淀粉水解培養(yǎng)基 英文名稱：The Hydrolysis of Starch Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 細胞中性脂質(zhì)油紅O染色試劑盒 50次 細胞脂質(zhì)過氧化物4-羥基壬烯醛（4－HNE）比色法測定試劑盒 20次 動物組織β-半乳糖苷報告基因活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑 20次 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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